细胞免疫篇1

【关键词】结肠肿瘤;rko细胞系;p物质;受体,神经激肽;免疫细胞化学

【摘要】

目的探讨p物质及其受体神经激肽1(nk1)在体外培养的结肠癌细胞系rko中的表达及免疫细胞化学定位。方法将rko细胞接种于提前放入盖玻片的6孔板进行细胞培养,细胞融合30％时将盖玻片取出进行免疫细胞化学染色。结果在rko细胞系中p物质和nk1呈阳性表达，p物质阳性表达多数位于细胞浆；而nk1阳性表达多数位于细胞浆，少数位于细胞膜。结论神经内分泌机制可能参与了结肠癌的发病过程。

【关键词】结肠肿瘤;rko细胞系;p物质;受体,神经激肽;免疫细胞化学

immunocytochemicalexpressionsofsubstancepandneurokinin1inrkocellsofcoloncancer

］

zhaolingling,chenhua,wangjigang(qingdaouniversitymedicalcollege,qingdao,266003,china);

［abstract］objectivetoinvestigatetheimmunoexpressionsofsubstancepandnk1inrkocelllinesofcoloncancer.methodsrkocellswereinoculatedonthecoverglassandculturedon6wellplate.thecoverglasswasremovedfromtheplateupon30%ofcellfusion,andtheexpressionsofspandnk1oftheculturedcellswerecheckedviaimmunocytochemicalstaining.resultspositiveexpressionsofsubstancepandnk1weremainlyfoundwithinthecytoplasmoftherkocells,whileafewofnk1notedonthemembrane.conclusiontheneuroendocrinemechanismmightinvolveintheprocessofmorbidityofcoloncancer.

［keywords］colonicneoplasms;rkocellline;substancep;receptors,neurokinin1;immunocytochemistry

p物质属于速激肽家族,由ppta基因编码,11个氨基酸组成[1]。它能够特异性结合并激活其受体神经激肽1(nk1),后者属于7次跨膜g蛋白耦联受体[2]。nk1受体激活后,以g蛋白作为第二信使活化pkc和mapk/erk通路[23]。近年来研究显示,g蛋白耦联受体介导的信号转导通路参与了某些恶性肿瘤的发病过程。赵双罗等[4]研究显示，从溃疡性结肠炎到癌前病变，再到结肠癌病人血浆中的p物质水平逐级增高。但目前还没有p物质在结肠组织及细胞中表达的报道。nk1在结肠癌组织及细胞可表达[5]。目前对p物质和nk1在结肠rko细胞系中表达情况及定位尚不清楚。本文采用免疫细胞化学染色技术，研究p物质和nk1在体外培养的rko细胞系中的表达情况及免疫细胞化学定位。现将结果报告如下。

1材料与方法

1.1材料

兔抗人p物质多克隆抗体（1∶200，工作液），购自北京中杉金桥生物公司；兔抗人nk1多克隆抗体(1∶200)购自millipore公司；正常山羊封闭血清、elivisiontm试剂盒、dab显色剂等均购自福州迈新公司；dmem(低糖)、胰酶(含有0.5g/l胰酶和0.53mol/ledta)购自gibco公司；胎牛血清购自paa公司。人结肠癌rko细胞系由浙江大学来茂德教授馈赠。

1.2细胞培养

rko细胞培养于含有体积分数0.05胎牛血清的培养液中,隔天换液。在细胞90%融合时将其接种于预先置入盖玻片的6孔板中,每孔细胞数约5×105个,置于37℃含体积分数0.05的co2培养箱(美国shellab公司)中继续培养。在种板第2天,贴壁细胞融合30％将盖玻片取出,置40g/l甲醛中固定15min。

1.3免疫细胞化学染色

采用elivision两步反应系统免疫细胞化学染色,所有染色过程在室温下进行。细胞固定标本经pbs冲洗后先用体积分数0.30h2o2孵育15min,然后滴加非免疫山羊血清30min封闭非特异性结合位点。一抗孵育1h后,pbs冲洗，后滴加试剂a(增强剂)作用30min和试剂b(辣根过氧化物酶聚合物)作用20min,用dab显色3min。最后，苏木精复染，盐酸乙醇分化，氨水返蓝，梯度乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封片。以正常山羊封闭血清代替一抗做阴性对照。采用乳癌冷冻组织切片作为阳性对照。1.4结果判定

所有染色标本采用olympusbx51显微镜观察,阳性判断标准参照文献[6]：以低倍镜下见到染色呈明显棕黄色的细胞为阳性。每个标本在高倍镜下(400倍)随机选取10个视野计数阳性细胞数。

1.5统计学分析

采用spss16.0及ppms1.5[7]软件进行数据处理，结果以±s表示,组间比较采用t检验。

2结果

rko细胞贴壁良好,约30%融合,在盖玻片上呈树枝状,细胞呈多角形,界限清晰。经免疫细胞化学染色后,绝大多数细胞中p物质均呈阳性反应,棕黄色颗粒位于细胞浆。nk1在rko细胞系中定位于细胞浆,少数表达在细胞膜，绝大多数rko细胞呈强阳性表达。阴性对照未见阳性着色。每高倍视野rko细胞系中p物质和nk1阳性细胞数分别为(80.17±9.70)、(77.33±8.52)个，二者比较，差异无显著性(t=0.537,p>0.05)。

3讨论

nk1广泛分布于神经组织和非神经组织[7],参与了包括肿瘤在内的许多疾病过程。各种肿瘤细胞表达的nk1能够高度依赖于p物质的刺激,从而使细胞持续增殖。nk1能引起ca2+动员,pkc以及mapk/erk的活化。nk1活化后以g蛋白为第二信使激活下游信号转导通路,其β和γ亚单位能够活化raf1和erk1/2而引起细胞的转化,不同条件下这条途径既可引起细胞增殖也可促进细胞的凋亡[78]。本研究显示,p物质和nk1在体外培养的结肠癌细胞系rko中均呈阳性表达，提示两者可能参与了结肠癌的发生。nk1受体在结肠癌细胞高表达与rosso等[5]的研究结果相一致。由于p物质及nk1与神经内分泌系统密切相关,提示神经内分泌机制可能参与了结肠癌的发病过程。p物质能够上调nk1的表达水平[10],rko细胞系中p物质阳性表达也提示nk1高水平表达。singh等[11]认为,p物质刺激部分癌细胞的生长作用可能是通过它和一些细胞因子(il21、il26和scf等)的共同作用而引起的。本文研究结果表明,rko结肠癌细胞本身存在p物质的高表达,这提示p物质以自分泌方式刺激肿瘤细胞的生长。另外,petel等[12]报道在细胞培养上清液中存在p物质,这表明p物质也可能通过旁分泌方式上调并激活细胞膜上nk1受体,从而激活下游信号转导通路引起肿瘤细胞的增殖。考虑到两种方式同时参与了p物质对结肠癌生长的影响过程,我们认为阻断其中任何一种方式都可能起到抑制肿瘤生长的作用。

免疫化学方法简单实用,用该法标记特定类型的肿瘤标志物一直是重要的辅助诊断手段[1314]。本研究免疫细胞化学染色结果证明p物质和nk1两种神经内分泌指标在rko细胞系高表达,这为临床上具有该细胞系特点的结肠癌提供了一种新的简单可靠的诊断指标。

综上所述,本研究结果不但提供了结肠癌rko细胞系的一种新特性,也为新的抗肿瘤药物研究提供了理论基础。进一步研究p物质及其受体nk1与rko细胞系的关系,以阐明二者在该类型结肠癌中的作用,对研究结肠癌的发生机制有着新的意义，并可能为结肠癌的临床诊断提供新的指标。

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细胞免疫篇2

【关键词】肿瘤;细胞免疫疗法;分子生物学

机体免疫系统能够识别和清除肿瘤细胞已被许多实验明确证实。细胞免疫疗法通过提取人体最有力攻破癌细胞的免疫细胞，对其进行诱导、扩增、激活，使其具有识别和杀死肿瘤细胞的能力后再回输到病人体内，通过增强机体对肿瘤细胞的免疫应答能力的方式来抑制或消除肿瘤的生物细胞免疫疗法。近年来的研究显示，以免疫治疗为主体的肿瘤生物治疗已被公认为继手术、放疗和化疗后的肿瘤治疗的第四模式，其疗效已在多种肿瘤的治疗中得到验证。本文就细胞免疫疗法在临床多种癌症治疗中的应用进行综述。

1过继性细胞免疫治疗白血病

细胞免疫治疗成为白血病治疗中一个迅速发展的领域。Armstrong等曾将白血病的细胞免疫治疗大致分为两类：一是输注可在体内刺激抗白血病活性的细胞，即疫苗治疗；二是输注有内在抗白血病活性的免疫效应细胞，即过继性细胞免疫治疗。有学者用肿瘤特异抗原（TSA）/肿瘤相关抗原（TAA）的某些肽段致敏肿瘤患者缓解期自身T淋巴细胞，诱导产生特异性CTL，在体外可有效杀伤患者自身肿瘤细胞，而对正常造血细胞无毒作用。Sprent等报道了DC来源的exosomes能在体外直接诱导CD8+T细胞扩增，因此认为其在体外扩增抗原特异性CTL方面具有重要的理论和临床应用价值。乔建辉等在国内首次报道DSI能促进异基因造血干细胞移植后供者嵌合体的增加，有利于供者细胞植入，而且具有并发症少，较好的GVL效应等优势。最近一项针对半相合移植后复发患者的DSI临床报道显示，20例复发患者中有8例达到完全缓解，平均生存1118d，治疗效果比较满意。

2肺癌的细胞免疫疗法

免疫治疗是肺癌综合治疗的主要手段之一，细胞免疫治疗通过给机体输注抗肿瘤免疫效应细胞的方法来达到治疗肿瘤的目的。许多动物实验和临床资料表明，IL一2／LAK细胞疗法具有抑制瘤、杀伤瘤作用。近来，Ebina将BAK疗法应用于非小细胞肺癌(NSCLC)的治疗。该研究提示具有免疫活性的NSCLC患者更适合BAK疗法。BAK细胞治疗可纠正免疫功能低下，有利于延长NSCLC患者的生存期，提高生存质量。TIL细胞治疗结肠直肠癌、恶性黑色素瘤与肾细胞癌已显示一定的临床疗效。近年来，CD3AK细胞抗肿瘤作用的基础和临床应用研究取得了长足进展。杨新静等将CIK细胞用于肺癌的治疗研究，研究发现经过体外制备的CIK细胞不仅增殖速度快，而且对肺癌细胞体内外均具有高效的杀伤活性。

3卵巢癌的免疫治疗

卵巢癌是女性生殖器常见恶性肿瘤之一，近年来，有关卵巢癌免疫治疗方面的研究较多。Bjorge等指出，因为卵巢癌在远处转移前的相当长一段时间内都存在于腹膜腔内，并且卵巢癌术后遗留微小病变细胞处于休眠状态或至少处于低代谢率，所以卵巢癌非常适用于局部单克隆抗体的免疫治疗。过继细胞免疫治疗，其优点是绕过了机体免疫系统对肿瘤抗原的免疫耐受效应。Lambeck等研究了在卵巢癌患者体内的p53特异性T细胞反应，表明卵巢癌患者体内存在一种弱的混合型辅T细胞，即p53特异性T细胞可以诱导p53特异Thl／CTL免疫，其研究结果支持了使用p53长肽作为瘤苗免疫策略的理论。卵巢癌的免疫治疗仍处于实验室研究阶段和部分临床前期研究阶段，需对肿瘤特异抗原、机体抗肿瘤免疫、肿瘤化疗与免疫治疗的时序等基础和临床问题进行更深入的研究。

4EBV病毒特异性CTL治疗鼻咽癌

鼻咽癌细胞表达HLAI类分子，抗原递呈机制正常。鼻咽癌病人外周血中存在EBV特异性CTL，具备细胞免疫治疗的基础。Chua等报告EBV特异性多克隆CTL(5×107―3x108)治疗4例晚期鼻咽癌病人，除外周血EBV拷贝数降低外，没有观察到肿瘤缩小。Straathof等报告6例复发性／难治性鼻咽癌病人接受EBV特异性多克隆CTL(2×107／m2-2×10S／m2)后，CR2例，PR2例，SDl例，PD1例。5例病人的外周血EBV拷贝数在6周内明显降低，另1例在治疗前没有检测到EBV。EBV特异性多克隆CTL输注没有明显毒副作用。生物治疗技术的进步使鼻咽癌患者获得更多治疗机会，但是，鼻咽癌是地区性疾病。受到国际社会的关注程度有限，需要更多的循证医学证据来证实生物治疗对鼻咽癌的有效性。

随着肿瘤分子生物学和肿瘤免疫学的发展，已能在体外培养出许多种类不同的特异性和非特异性的抗肿瘤效应细胞，尤其是肿瘤抗原的鉴定和合成、四聚体检测及分拣以及DC细胞的培养，使得能在体外成功地培养出大量的肿瘤特异性CTL细胞，真正开始了主动免疫和过继性免疫相结合的肿瘤特异性免疫治疗。细胞免疫治疗将与传统的肿瘤治疗(手术，化、放疗)和新的治疗方法如基因治疗、抗血管生成治疗等相联合，使其在肿瘤治疗中发挥重要的作用。

参考文献

细胞免疫篇3

【关键词】抗原递呈细胞角膜上皮细胞外周血单个核细胞共同刺激通路

theimmunologicalcharacterofcornealepithelialcells

wangfan.

universityeyehospitalhamburgeppendorf,universityofhamburg,hamburg20246,germany

［abstract］objective:toinvestigatethecapabilityofcornealcellstostimulatelymphocyteproliferationandtheexpressionofcostimulatorymoleculesonprimaryhumancornealepithelialcells.methods:humancornealepithelialcellswerecocultivatedwithperipheralbloodmononuclearcells(pbmc).expressionofhlaclassⅱantigens,cd40,cd154,cd80andcd86wasmeasuredbyimmunohistochemicalstaining,andtheexpressionofsuchmoleculesaboveonrejectedcornealgraftswascontrastinglyassessed.activationoflymphocyteswasdeterminedbymeasuringupregulationofcd69byfacsanalysis.results:hlaⅱexpressionwasdetectableonhumanprimarycornealepithelialcells,andfurthermore,upregualtionofcostimulatorymoleculescd40andcd80werealsofoundafterinductionwithγinterferon.bothofhlaandcd40wereexpressedonrejectedcornealgrafts.tlymphocyteswereactivatedbyepithelialcellsinthecoculturesystem.conclusion:humancornealepithelialcellsareinvolvedinrejectionprocessofthecornealtransplantation.theimmunologicalreactionistriggeredbyepithelialcells,andendothelialcellssufferasthetargets.

［keywords］antigenpresentingcells(apc)；cornealepithelialcells；peripheralbloodmononuclearcells(pbmc)；costimulatorypathway

预防和治疗同种移植排斥反应仍然是当今角膜移植术最具有挑战性的领域。WwW.133229.cOM几十年来利用动物模型研究已证实：角膜移植排斥反应像其他的器官移植一样，是个t淋巴细胞介导的免疫过程。同其他的移植组织一样，角膜移植排斥反应主要依赖于t细胞介导的同种异体反应［1］。人类白细胞抗原(hla)是免疫反应中第一信号的主要靶分子，特别是hlaⅱ类抗原在免疫细胞之间的反应中发挥着重要的调节作用［2］。有证据表明hlaⅱ类抗原仅限于角膜朗格罕氏细胞和血管内皮细胞。但是，hlaⅱ类抗原也表达在同种移植排斥反应后的其他角膜细胞上［3］。除了t细胞活化，一个有效的免疫应答的发展也要求第二信号或共同刺激信号，对于t细胞的增生和细胞因子的分泌，它是非特异性的［4］。这个共同刺激信号是由b71(cd80)或b72(cd86)与t细胞表面它们的受体cd28和ctla4之间的反应所介导的。其他的t细胞表面分子，像cd154(cd40的受体)、cd2、lfa1和icam1构成了第二信号。角膜移植实验模型研究证明，阻断cd80/86cd28和ctla4ig之间的反应延迟了免疫反应，ctla4ig结合抗cd154抗体或者可的松治疗进一步推迟了鼠类角膜移植排斥反应的启动［5］。排斥反应的组织学研究表明，淋巴细胞，单核细胞和巨噬细胞已经被确认为优势的免疫细胞，导致了角膜组织细胞与浸润的淋巴细胞之间的免疫反应参与角膜移植排斥反应机制的假想［6］。但是，角膜细胞导致t淋巴细胞增生的过程尚未明了。本实验中，我们假设在角膜移植排斥反应过程中，角膜上皮细胞同样作为抗原递呈细胞参与了免疫反应。

1材料与方法

1.1角膜上皮细胞的培养

角膜上皮细胞来自内皮细胞数量不足、不适于角膜移植术的人供体角膜，或角膜移植术的角巩膜环。细胞培养于0.5ml的培养液ham’sf12/dmem(gibcoinvitrogen)，添加10%胎牛血清fcs(gibcoinvitrogen)，10ng/ml鼠上皮生长因子(biochrom)，5μg/ml牛胰岛素(sigma)，0.1μg/ml霍乱毒素(sigma)，5mg/l转铁蛋白(sigma)，0.18mmol/l腺嘌呤(sigma)，0.4mg/l水合可的松(sigma)，2nmol/l三碘甲状腺氨酸(sigma)，4mmol/l谷氨酸(biochrom)和抗生素［7，8］。每周更换2次培养液。

1.2提取外周血单个核细胞（pbmc）

从健康志愿者采集大约15ml的新鲜血液，10ml的histopaque1077缓慢加入10ml的新鲜血液表面，400g离心5分钟。将离心后中间的透明相转入另一个干净的离心管，pbs冲洗，细胞悬液250g离心10分钟。细胞沉淀再次溶解于rpmi1640培养液(gibcoinvitrogen)，添加2mmol/ll谷氨酸，1mmol/lhepes液(gibco)，10%胎牛血清(gibcoinvitrogen)和抗生素。每次提纯细胞，应用台盼兰染色排除试验测定细胞的完整性和细胞数量。

1.3共同培养角膜细胞与外周血单个核细胞

2×104人角膜上皮细胞培养于8孔培养板，部分细胞加入1000u/mlγ干扰素。3天后，新鲜提纯的pbmc(1×106/孔)和抗cd28单克隆抗体(1μg/ml)加于角膜上皮细胞培养板中，继续进行无γ干扰素的培养。pbmc与预先固定的抗cd3抗体（4μg/ml）和抗cd28抗体(1μg/ml)作为阳性对照，培养无任何添加物的pbmc作为阴性对照。所有共同培养物保持培养在rpmi1640添加10%胎牛血清培养液中，继续培养2天。共同培养系统中的细胞悬液收集后用于荧光辅助细胞筛选分析，用70%甘氨酸乙醇缓冲液固定附着于培养板表面的角膜细胞和pbmc，或者10%的福尔马林固定做免疫组织化学分析。

1.4免疫组织化学染色

1.4.1培养2×104人角膜上皮细胞，生长至细胞融合状态后固定于70%甘氨酸乙醇缓冲液或10%的福尔马林。细胞分别与抗hladp、dq、dr(dakocytomation)、cd40(acris)的单克隆抗体孵育。稀释抗体于1∶100室温下孵育30分钟。根据说明书操作步骤应用lsab2试剂盒(dakocytomation)检测已结合的抗体：孵育生物素结合的链接抗体10分钟，碱性磷酸酶标记的链霉抗生物素蛋白孵育10分钟，再伴随10分钟的底物色原溶液反应。苏木精对比染色，干燥后水溶性封片剂(merck)封片。相对染色强度分类为：-（阴性），+（弱阳性，<25%），（中度，25%～50%），（强,50%～75%），（极强，75%～100%）。

1.4.2γ干扰素刺激的角膜细胞和pbmc共同培养系统实验也同法固定，分析cd80、cd86和cd154共同刺激分子通路表达。另外，检测共计15个来自穿通性角膜移植术患者的角膜植片。其中，10个角膜诊断为角膜内皮功能失代偿，5个角膜诊断为圆锥角膜。角膜植片固定于4%的福尔马林，石蜡包埋切片，检测hladp、dq、dr、cd40和cd154的表达。

1.5荧光辅助细胞筛选分析（facs）

荧光辅助细胞筛选分析仪(bectondickinsonfacscalibur)进行双色分析。在pbmc与γ干扰素刺激的人角膜上皮细胞共同培养体系中，用抗cd3fitc（t淋巴细胞）和抗cd69pe单克隆抗体(活化的t淋巴细胞)来定量分析活化的t淋巴细胞的百分比。细胞分别和饱和浓度(1μg/106cells)的抗cd3fitc、抗cd69pe抗体以及阴性对照抗体在暗处4℃孵育30分钟。facs分析之前10分钟加propidiumiodide(sigma)入样本，至最终浓度为1mg/ml，根据前向角散射（forwardscatter,fsc）的形态特征和propidiumiodide的染色来分类淋巴细胞和单核细胞。应用cellquest软件(bectondickinson)进行数据分析。

2结果

2.1角膜排斥反应植片

圆锥角膜切片显示角膜各层无炎性细胞和hlaⅱ类分子，而排斥的角膜移植片展示强阳性的hlaⅱ类抗原表达。阳性细胞特别表达在角膜上皮的基底层，甚至在内皮层。在角膜实质层，阳性细胞临近于新生血管区域，另外一些阳性细胞位于血管内皮，还有一些散布于实质层各处，见图1。在植片边缘增生和血管化的结膜组织上，也有强烈的hlaⅱ类抗原阳性细胞。10个排斥反应的植片中有5个显示cd40阳性细胞位于角膜上皮层的表层。角膜各层细胞未见cd154阳性细胞。所有的圆锥角膜均为cd40和cd154阴性。

2.2角膜上皮细胞的hla、cd40、cd80和cd86表达

无γ干扰素刺激的超过50%的培养的人角膜上皮细胞呈现hlaⅱ类抗原阳性，γ干扰素诱导以后的细胞显示了明显的表达上调，几乎100%的角膜上皮细胞为阳性染色，在样本中，可观察到阳性细胞或在细胞表面或在细胞浆中，见图2。无γ干扰素刺激下，所有的角膜上皮细胞为cd40阳性，γ干扰素处理后进一步提高了阳性表达。无论γ干扰素诱导与否，超过50%的角膜上皮细胞显示cd80阳性，而cd86为阴性，见表1。表1免疫组化分析hladp、dq、dr(人类白细胞抗原)、cd40、cd80和cd86在角膜上皮细胞的表达（略）

2.3共同培养系统的cd80、cd86和cd154表达

cd80/cd86、cd40和它的受体cd154是hla信号系统之外的第二信号系统，是t细胞增生和细胞因子分泌所必需的条件。在共同培养系统中，cd80和cd86均可被观察到阳性表达，却无cd154阳性细胞，见表2。表2角膜上皮细胞和pbmc共同培养体系中的cd80、cd86和cd154的表达（略）

2.4荧光辅助细胞筛选分析（facs）

cd69作为活化的t淋巴细胞的标记物，在pbmc和角膜上皮细胞共同培养之后被测定。最高水平的应答反应在pbmc与γ干扰素预先诱导的角膜上皮细胞共同孵育系统中被检测到，见图3。

3讨论

临床上，角膜移植的排斥反应多数被认定为角膜内皮功能的失代偿。在此研究中，我们探讨了角膜上皮细胞的培养以确定它们在体外作为潜在的抗原递呈细胞的分子表达和能力。至今，尚缺乏对这些细胞的功能和免疫学特性的定义。

第一信号：hlaⅱ类抗原。我们发现hlaⅱ类抗原表达在未受诱导的人角膜上皮细胞上，且能够被γ干扰素提高其表达。实验性鼠角膜移植模型显示可诱导新生血管化和淋巴排泄通道发展的外界刺激也可以提高淋巴细胞的活化［9］。本研究中，我们发现排斥反应的移植片增厚，同时有新生血管长入，并有hlaⅱ类抗原表达阳性的细胞浸润。免疫淋巴细胞可以沿着这些新形成的血管从淋巴结循环至角膜并破坏免疫赦免状态，从而导致移植失败，植片被排斥。

第二信号：共同刺激通路。cd154：cd40通路在细胞介导的免疫反应的生成中是重要的，并且被认为是t细胞活化过程中的关键通路［10］。cd40被发现是抗原递呈细胞和间叶细胞的变种，包括b淋巴细胞、树枝状细胞、巨噬细胞、单核细胞、内皮细胞和上皮细胞［1114］。cd154是cd40的配体(cd40l)，是肿瘤坏死因子(tnf)家族成员。cd154和cd40结合诱导了信号通道的开启，从而导致cd80和cd86的表达升高［1517］。动物实验模型显示，阻断cd40：cd154通路足以诱导th1介导的接触性超敏反应耐受，从而有效地延长植片的存活率［1822］。

两条证据强调了在移植排斥过程中，t细胞共同刺激通路中b7：cd28通路的任务。首先，体外药物阻断b7和cd28分子之间的反应，可诱导t细胞递呈同种抗原长时间持续的无反应性应答。其次，在血管化的器官移植后，b7分子可在24小时之内被诱导在血管内皮上，意味着t细胞能够通过移植的器官本身接受共同刺激信号［23］。实验证明同种角膜移植术后结合抗cd80和抗cd86单克隆抗体治疗可有效地延长角膜移植片的存活［24］。这些结果说明了cd80和cd86共同刺激分子在角膜移植排斥反应中的重要作用。

角膜各层的排斥反应可各层独立发生，也可同时混合发生［25］。通过共同培养研究得出结论，pbmc和角膜上皮细胞之间的接触可促进共同刺激分子在角膜细胞上的表达。荧光辅助细胞筛选分析和免疫组织化学染色显示人角膜上皮细胞刺激t淋巴细胞表达高水平的cd69。t细胞受体识别角膜上皮细胞上的hla/多肽复合体得到信号1，同时，提供cd28抗体以结合角膜细胞上的cd80或cd86分子，得到信号2。信号1和信号2导致了t细胞活化和增生的阳性刺激。同理作用于cd40cd154第二通路。本研究阐述了角膜移植排斥反应的机理以及角膜上皮细胞作为潜在抗原递呈细胞的功能，供体角膜上皮细胞和受体t淋巴细胞的接触触发了移植片的同种免疫性反应，最终作用于角膜内皮细胞，导致内皮水肿，功能失代偿，移植失败。

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细胞免疫篇4

间充质干细胞(mesenchymalstemcells，MSCs)是存在于骨髓中具有多向分化能力的一类干细胞。MSCs具有如下特性：具有塑料粘附性;细胞表型为CD105+、CD73+、CD90+、CD45-、CD34-、CD14-、CD11b-、CD79α-、CD19-、HLADR-;具有多向分化潜能，能分化为成骨细胞、脂肪细胞和成软骨细胞。除此之外MSCs具有低免疫原性和独特的免疫调节作用，能逃避免疫识别、抑制免疫应答。以上生物学特性使其有望用于组织修复、抑制免疫排斥反应的发生和代谢性疾病的细胞治疗。本文对MSCs的免疫调节作用进行综述。

1MSCs在体外的免疫调节作用

1.1MSCs对T淋巴细胞的免疫调节作用

1.1.1MSCs对不同因素作用下的T细胞增殖均有抑制作用：目前对于MSCs的免疫调节作用的研究大多集中于骨髓MSCs对T细胞的负性调控作用。2002年就有研究证实，人MSCs可以抑制混合淋巴细胞反应(mixedlymphocytereactions，MLRs)中或由多克隆活化剂刺激引起的T细胞增殖[1]。Krampera等[2]进一步证实，小鼠MSCs在抗原特异性反应中，亦能发挥对细胞增殖的具有抑制作用，且MSCs对T细胞的增殖的抑制不受MHC限制。MSCs不仅能够抑制植物血凝素(phytohemagglutinin，PHA)刺激引起的CD4+、CD8+T淋巴细胞的增殖，而且对其活化表型CD25、CD38、CD69的表达也具有抑制作用[3]。Ramasamy等[4]研究了人骨髓MSCs对T细胞反应不同阶段的免疫调节作用，结果显示人骨髓MSCs能抑制CD3mAb联合CD28mAb活化的T细胞的增殖。有研究发现，人胎盘来源的MSCs能直接抑制外周血和脐带血来源的T淋巴细胞的增殖[5]。此外，大鼠骨髓MSCs能抑制刀豆球蛋白A(ConA)刺激引起的淋巴细胞及淋巴母细胞的增殖，该抑制作用呈剂量依赖性，并且对活化的淋巴细胞的抑制作用明显强于对初始淋巴母细胞的抑制作用[6]。

1.1.2MSCs对T细胞增殖抑制作用的可能机制：MSCs并不是通过诱导增殖细胞的凋亡，而可能是通过抑制细胞的分裂来发挥作用。Magatti等[7]用活化的T细胞与MSCs共培养后，通过对细胞周期的研究发现MSCs可以通过抑制T细胞周期蛋白D2、活化周期蛋白依赖激酶抑制物p27kip1阻断T细胞分化进入G1期，从而抑制T细胞增殖，而且当从体系中移去MSCs后，即使加入外源性的IL2，T细胞仍不能增殖。

MSCs对T淋巴细胞增殖的抑制作用与可溶性因子有一定关系。DiNicola等[1]在实验中分别用转化生长因子(TGFβ1)抗体和肝细胞生长因子(HGF)抗体进行干预，证实TGFβ1和HGF参与了MSCs对T淋巴细胞的增殖的抑制作用。Meisel等[8]研究证实，在IFNγ诱导下MSCs可以表达吲哚胺2，3二氧化酶(indoleamine2，3dioxygenase，IDO)，后者可以将色氨酸降解为犬尿氨酸发挥对T淋巴细胞增殖的抑制作用。此外，IDO还能调节血红素加氧酶1(hemeoxygenase1，HO1)在人和大鼠骨髓MSCs上的表达，而HO1可以通过抑制淋巴细胞的增殖和TLR的活化介导MSCs的负性免疫调节作用。Selmani等[9]研究表明，人骨髓MSCs分泌的可溶性HLAG5能抑制T细胞的增殖，而HLAG5的分泌有赖于活化的T淋巴细胞与MSCs接触产生的IL10。Sheng等[10]用MSCs与淋巴细胞共培养，刺激淋巴细胞后检测上清液中的细胞因子未发现IL10、IL12及TGFβ，而IFNγ和TNFα有较高水平，且IFNγ可以促使B7H1在MSCs上表达的上调，在触发MSCs的免疫抑制作用中起重要作用。可见，MSCs对T细胞的免疫抑制作用由若干可溶性分子所介导，而对于这些分子的作用，不同的研究得出的结论不尽相同，这可能与实验条件不同有关。

MSCs还可以通过上调调节性T细胞(regulatoryTcells，Tregs)来发挥免疫调节作用。Aggrawal等[11]将人骨髓MSCs和同种异体PBMCs在rhIL2刺激的条件下共培养5d后，发现CD4+、CD25+的Tregs明显增多。Dilanni等[12]用人MSCs和不同Tregs亚群进行共培养，结果证实MSCs能募集Tregs并维持其表型和功能。人胎盘来源的MSCs亦能通过上调Tregs数量来发挥负性免疫调节作用，但Tregs的具体作用机制还有待进一步研究。

1.2MSCs对B淋巴细胞的调节作用

1.2.1MSCs对B细胞的增殖和功能均有抑制作用：MSCs不仅可以抑制B淋巴细胞的增殖，而且能影响其功能。研究发现，MSCs对T细胞依赖性刺激和有丝分裂原刺激引起的脾脏B淋巴细胞的增殖均有抑制作用[13]。Corcione等[14]研究表明，人骨髓MSCs对Ig抗体、可溶性CD40配体、IL2和IL4激发下的B淋巴细胞增殖均有抑制作用，且B细胞的功能也受到抑制，包括B细胞向抗体分泌细胞的分化和B细胞的趋化性。而Rasmusson等[15]研究显示，在不同水平脂多糖(LPS)或病毒抗原的刺激下，人骨髓MSCs可以刺激或抑制B细胞分泌IgG，表明MSCs对B细胞功能的调节作用受多种因素的影响。

1.2.2MSCs对B细胞抑制作用的可能机制：研究表明，小鼠MSCs可以通过上调细胞周期抑制性蛋白p27kip1以及下调G1cyclinD2蛋白来抑制B细胞的增殖[13]。与此相似，Corcione等[14]报道人骨髓MSCs是通过使B细胞滞留于G0/G1期，而非诱导凋亡来抑制B淋巴细胞的增殖，且MSCs对B细胞功能的抑制作用有赖于MSCs与B细胞相互作用后产生的可溶性因子，这些因子可能为TGFβ1、HGF、PGE2或吲哚胺2，3二氧化酶(IDO)。

而Krampera等[16]研究表明，人MSCs对B细胞增殖的抑制作用并不依赖于细胞接触，而需要IFNγ的参与，后者能诱导MSCs产生免疫抑制性IDO。因此，对于MSCs对B淋巴细胞的免疫调节作用及相关机制有待进一步研究。

1.3MSCs对NK细胞的调节作用

1.3.1MSCs对NK细胞增殖及其功能的影响：研究表明，人MSCs能抑制由IL2或IL15引起的NK细胞的增殖。Sotiropoulou等[17]研究发现，人骨髓MSCs可以剂量依赖性抑制NK细胞分泌细胞因子、下调NK细胞对靶细胞的杀伤作用。MSCs还可以对NK细胞亚群产生不同的影响[16，17]。Spaggiari等[18]研究表明，人骨髓MSCs不仅能抑制NK细胞的增殖，而且能抑制其效应功能的诱导。

1.3.2MSCs对NK细胞调节的可能机制：研究[17]表明，人MSCs对NK细胞的抑制作用，需要细胞间接触或可溶性因子TGFβ1和PGE2。MSCs上的iCAM1与NK细胞上的LFA1的相互作用，有助于细胞因子的产生。Poggi等[19]将新分离出的NK细胞与人骨髓MSCs孵育后，前者能表达活化抗原CD69活化标记，并释放IFNγ和TNFα。此外活化的NK细胞受体NKp30、NKG2D和DNAM1在NK细胞介导的对MSCs的细胞毒性中起重要作用，MSCs能依次表达这些受体的相应配体，包括ULBP、PVR和nectin2。

1.4MSCs对树突状细胞的免疫调节作用MSCs能够抑制树突状细胞(dendriticcells，DCs)的分化、成熟和功能。Dazzi等[20]报道，与MSCs相互作用后DCs的细胞周期停止在G0/G1期。Jung等[21]研究了人骨髓MSCs对DCs趋化活性的影响，结果显示MSCs能抑制趋化因子CCL21对DCs的定向迁移作用。Aggrawal等[11]研究表明，MSCs可下调髓样DCs对TNFα的分泌，上调浆细胞样DCs对IL10的分泌，这种效应导致Th1细胞产生的IFNγ减少、Th2细胞分泌的IL4增加以及Tregs数量的增加。MSCs对DCs的抑制作用，可能由可溶性因子所介导，但其具体机制有待深入研究。

2MSCs在体内的免疫调节作用

MSCs可以通过对T细胞应答和B细胞应答的调节，以及对靶组织的旁邻辅助作用发挥临床疗效。Bartholomew等[22]研究发现，在对灵长类动物进行皮肤移植的同时植入同种异体MSCs，可以延长皮肤移植物的存活时间。Zappia等[23]在小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimentalautoimmuneencephalomyelitis，EAE)多发性硬化的发病初期，进行MSCs全身性输注，可以改善髓鞘少突胶质糖蛋白(oligodendrocyteglycoprotein，MOG)引起的EAE，并减轻T细胞、B细胞和巨噬细胞对中枢神经系统(centralnervoussystem，CNS)的浸润。且在体外进行MOG肽再次刺激不能引起经MSCs治疗的小鼠淋巴结内T细胞的增殖，这可能是诱导了T细胞无应答的结果。Uccelli等[24]在被动转移实验中将MSCs注入小鼠体内，结果显示MSCs能抑制其体内致病性蛋白脂质蛋白(proteolipidprotein，PLP)特异性抗体的分泌，并抑制PLP专一性T细胞的致脑炎能力。MSCs不仅可以迁移到淋巴器官，而且能进入发生炎症的中枢神经系统发挥对神经轴突的保护效应，且这种效应与MSCs向神经细胞的分化没有关系。此外，在体内对其他实验性疾病的研究也得出类似的结果。在对由链唑霉素诱导的糖尿病小鼠的研究中发现，MSCs能促进胰岛的内生性修复[25]。有研究[26]将MSCs与骨髓细胞同时输注给糖尿病小鼠，可以抑制β细胞特异性T细胞的增殖，并且能通过诱导其胰岛β细胞的再生而恢复胰岛素和葡萄糖水平。

3MSCs在临床的应用

基于MSCs的体内迁移能力和多向分化能力，MSCs已经被用于治疗儿童严重成骨不全病。结果证实MSCs可以加快骨的生长、增加全身无机物的含量以及减少骨折的发生[27]。但目前MSCs主要应用在对急性、严重性移植物抗宿主病(GVHD)进行治疗的研究中，输注后的MSCs可能是通过抑制供体T细胞对受者正常组织的组织相容性抗原的反应性发挥其对GVHD的负性调节作用。还有研究[28]将MSCs的免疫抑制作用应用于Crohn病的治疗中，发现MSCs可以促进胃肠上皮细胞的再生。以上结论表明，MSCs具有潜在的临床应用价值，但对于在治疗过程中可能出现的不良反应有待进一步的研究。

4结语

MSCs的研究开拓了干细胞的来源与临床应用的新领域，以其制备简便、来源广泛而日益受到科学界关注。MSCs所具有的多向分化和自我更新的特性，以及所具有的低免疫原性及免疫抑制作用，使得这类细胞在临床的组织再生和修复医学中具有十分广阔的应用前景，并且在免疫相关疾病的治疗中具有潜在的应用价值。因此，对于MSCs的生物学特性及免疫抑制机制的阐明，将对人类克服器官移植中器官短缺将对人类解决器官移植中器官短缺、再生医学中种子细胞来源困难以及自身性免疫疾病的治疗等临床难题，都具有十分重要而深远的意义。

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细胞免疫篇5

【关键词】细胞块；免疫细胞化学；胸腹水；肿瘤细胞

DOI：10.14163/ki.11-5547/r.2015.19.009

Researchandanalysisofcellmassimmunocytochemistryin65hydrothoraxandascitecasesLIUDe-mei.DepartmentofPathology，ShandongWeifangCityPeople’sHospital，Weifang261041，China

【Abstract】ObjectiveToinvestigateclinicalsignificanceofcellmassimmunocytochemistryinimprovingpositiverateoftumorcell，identifyingbenignandmalignantcells，determiningtumorcellsourceinhydrothoraxandascitecytologicaldiagnosis.MethodsAretrospectiveanalysisalongwithrelatedclinicaldatawasmadeonhydrothoraxandascitesmear，cellmass，andimmunocytochemicaldiagnosisin65cases.ResultsAmong65hydrothoraxandascitecases，3casesofthemhadveryfewtumorcellswithnegativecellmass.Theother62caseshadtotallycorrespondingsmearanddetectionresults.Therewere13caseswithouttumorcellorsuspectedcellinbenignsmearandcellmass，withnegativereport.Therewere49caseshadaccurateresultsforsuspectedpositivesmearandmalignantcellsourcebyimmunocytochemistry.ConclusionCellmassimmunocytochemistryprovidesgoodapplicationvalueforidentificationofbenignandmalignantcellandtissuesource，anditisworthyofpromotion.Itspositiverateislowerthannormalsmearinimprovement，andtheircombinationcanimproveaccuracyofdiagnosis.Combinedclinicaldataandcellularmorphologyarenecessaryforcellmassandimmunocytochemistry.Itisnecessaryforrationalchoiceandapplication.

【Keywords】Cellmass；Immunocytochemistry；Hydrothoraxandascite；Tumorcell

近年来，随着恶性肿瘤的发病率逐年升高并有年轻化的趋势，肿瘤的早期发现、诊断和治疗已成为医疗界的重点和难点课题[1]。特别对于浆膜腔积液是唯一体征的就诊患者，其细胞学检查则显得极为重要。因很多恶性肿瘤常仅表现为体腔积液而原发部位隐匿[2]，而单靠细胞形态很难明确肿瘤细胞来源和肿瘤细胞类型，因此免疫细胞化学的检测对鉴别诊断非常有价值[3，4]。近年来，随着细胞块及免疫学检测技术的发展和完善、抗原的纯化和抗体制备技术的提高，免疫细胞化学技术已成为辅助细胞病理学诊断的重要方法[5]。本文收集了本院65例胸腹水标本，进行普通涂片、细胞块及免疫细胞化学检测分析，旨在探讨细胞块免疫细胞化学在胸腹水肿瘤细胞学诊断中对于提高肿瘤细胞阳性率、鉴别细胞良恶性、确定恶性细胞来源的临床意义，现报告如下。

1材料与方法

1.1标本来源65例送检标本包括胸水47例，腹水18例，所有标本均来自本院2014年1～7月住院及门诊患者，其中男36例，年龄32～80岁，平均年龄61.6岁；女29例，年龄29～81岁，平均60.1岁。65例中37例具有恶性肿瘤病史，28例以胸腹水为首发症状，表现为胸闷、纳差、腹胀、肺不张、肺炎、胃溃疡、冠心病、电解质紊乱等，B超或CT检查显示胸腹腔积液。

1.2标本处理将临床送检的胸腹水标本置于50ml离心管内，2000r/min离心10min，弃取上清液，取离心后沉淀物或中间层的白膜（有核细胞层）涂片2张，95%酒精固定、HE染色；剩余标本（如果细胞量少则需多次离心）加入10%福尔马林固定液，离心、用滤纸包裹细胞团、脱水、浸蜡、包埋，制成石蜡细胞块，切片1张，HE染色。

1.3免疫细胞化学染色所用免疫化学试剂均购自北京中杉金桥生物技术有限公司，方法采用SP法，所有操作均由经验丰富的专业技术人员按说明书及标准操作完成。本室胸腹水免疫细胞化学常用检测项目有26项。见表1。

表1常用免疫细胞化学检测项目

免疫细胞化学项目

上皮源性标记CK广、EMA

肺来源TTF1、CK7、CK5/6、Syn、CgA、P63

卵巢来源CK7、CA125、WT-1

乳腺来源CA15-3、ER、PR、C-erbB-2、P53、CK7GCDFP-15

胃肠道来源CEA、CA19-9、CDX-2、CK20

间皮细胞来源Calretinin、WT-1

组织细胞来源CD56

淋巴细胞来源LCA、CD3、CD20

1.4细胞形态学观察观察细胞涂片的一般情况、细胞大小、形态、排列及细胞核的大小、形态、核浆比、染色质、核仁、核膜、胞浆等特点并结合临床资料，判定细胞良恶性。细胞形态学观察及判定标准参照诊断细胞病理学及细胞病理学鉴别诊断彩色图谱[2，6]，如良性间皮细胞形态：细胞圆形、边界清晰或微绒毛、核中心或偏心位、圆形或肾形、核膜边界清晰、光滑、染色质细颗粒状、均匀分布、单个或多个微小核仁、浆丰富、淡或浓、外周渐淡。腺癌细胞学特点：胞体大、大小不一、核浆比高、核畸形、核偏位、染色质粗糙、深染、胞浆丰富、多有分泌现象、常成团或状排列等。普通涂片与细胞块切片对照观察，对发现可疑细胞不能明确诊断者或有肿瘤细胞不能明确来源及肿瘤类型者，选择相应的免疫细胞化学项目进一步检测；对于涂片中仅有几个肿瘤细胞，而细胞块中未发现可疑细胞者，不再进行免疫化学检测。

1.5免疫细胞化学结果判定以原始涂片及细胞块中细胞学形态为基础，充分观察免疫化学标记后的目的细胞形态，结合不同抗体标记细胞不同的阳性部位及抗原在组织细胞分布的不规则性，避免假阳性及假阴性，严格按标准、准确判读免疫细胞化学标记结果。

2结果

65例胸腹水中有3例涂片仅见几个肿瘤细胞，而细胞块为阴性，其余62例标本涂片与细胞块检查结果完全相符（占95.4%）；其中13例良性病变标本涂片及细胞块均未查到肿瘤细胞或可疑细胞，报告阴性；5例可疑阳性及44例需鉴定肿瘤细胞来源的标本，通过免疫细胞化学均明确诊断结果。

65例标本恶性肿瘤细胞阳性52例（占80.0%），其中3例因肿瘤细胞极少，结合临床资料以细胞涂片结果报告；其余49例可疑阳性或阳性标本根据各例不同的细胞形态及鉴别诊断需要、参考临床资料，选择不同的项目组合，进行相应的免疫细胞化学检测证实或进一步确证为：肺癌27例，卵巢癌14例，胃肠道癌5例，乳腺癌1例，食管癌1例，胰腺癌1例，肾恶性肿瘤1例，纵隔肿瘤1例，恶性鞘膜瘤病1例。

52例恶性肿瘤胸腹水中腺癌38例，占73.1%；小细胞癌4例，占7.7%；鳞癌3例，占5.8%；其他恶性肿瘤5例，占9.6%；细胞学不能明确类型者2例，占3.8%。

3讨论

近年来，随着细胞学特别是细胞块技术的发展，免疫化学技术在胸腹水细胞学诊断中得到了进一步的应用。魏谨等[7]报道胸腔积液细胞块组阳性率为83.3%（25/30），高于常规涂片组46.7%（14/30），两者差异有统计学意义。而本文对65例胸腹水细胞块及免疫细胞化学研究显示，常规涂片组（真阳性率80%）敏感度略高于细胞块组（真阳性率75%），提示在提高肿瘤细胞阳性率方面，尤其当肿瘤细胞极少时，细胞块并不具优势。对于细胞形态学观察，常规涂片中细胞形态舒展，可观察细胞量大，易于辨认；而细胞块在制作过程中因脱水固定等程序，使细胞体积相对变小，形态略有变化，故不及常规涂片中形态典型，但肿瘤细胞的排列更接近组织学，便于与组织学对照，因此对于细胞块中细胞形态观察特别是异型性不明显的单个肿瘤细胞的观察，应与常规涂片相对照，二者相互结合对照观察可以弥补形态诊断上的不足。但细胞块具有可连续切片、可重复性、易于保存、做免疫组化染色定位准确、阳性率高、特异性强等优点[8-10]是普通涂片无法比拟的。

细胞块免疫细胞化学对于鉴别细胞良恶性直接体现于对细胞组织学来源的推断。通过免疫化学标记胸腹水中的可疑细胞为外来细胞特别是上皮源性的细胞等，间接判定良恶性。本文有5例胸腹水发现可疑细胞，通过免疫化学标记明确诊断为癌细胞，49例标本通过细胞块免疫细胞化学检测，明确诊断及组织类型45例（91.8%），结合临床资料符合诊断2例，仅能鉴别良恶性细胞但不能明确组织类型者2例。这可能与抗体特异性及抗体组合的合理选用有关，也与免疫细胞化学检测技术的局限性有关，有待于进一步研究和探索。

关于抗体组合的合理选用，一般应遵循两个原则，一是确定性指标与排除性指标联合应用，二是采用双标的方法。即选择一组至少两种互相支持的抗体，同时再选用反向否定的抗体，以同时获得双重互补，正反两方面的证实。同时为避免假阳性和假阴性的发生，选择正确的阳性和阴性对照。因为抗体的相对特异性和一种抗原在同一种肿瘤以及不同肿瘤间的异源性表达，仅用一种抗体辅助诊断易产生误差，故宜选用几种适当的抗体组合应用以提高诊断的敏感性和特异性[9，11]。本文对65例胸腹水细胞学诊断研究显示，细胞块免疫细胞化学在胸腹水肿瘤细胞学诊断中对于细胞良恶性的鉴别和鉴别组织来源具有良好的应用价值，值得推广应用。但在应用过程中必须注意以细胞形态学为基础，与临床资料相结合，合理选择检测项目，做到三者联合应用，对于提高细胞学诊断水平至关重要。

参考文献

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细胞免疫篇6

那么，“生物免疫治疗”到底是何方神圣？对肿瘤治疗能起什么作用？哪些病人才适合这样的治疗方式呢？

生物治疗：

对付肿瘤的未来方向

据广州医学院附属肿瘤医院肿瘤内科主任医师金川介绍，手术、放疗和化疗是目前公认的肿瘤治疗“指定动作”。但一个不可回避的事实却是，光靠这些传统的方法，已经难以杀灭患者体内残存的肿瘤细胞。正因如此，随着科技进步，目前肿瘤治疗已进入生物治疗时代，而且生物治疗将成为日后肿瘤治疗的主导。

而“免疫细胞治疗”其实就是生物治疗的一种。“说起‘生物治疗’，大家可能觉得很陌生，但如果提及靶向治疗，相信大家都不陌生，其实靶向治疗就是生物治疗的一种。”金川说。目前临床上比较常见的生物治疗方法，一种是靶向药物，另一种则是免疫细胞治疗。

作用机理：

激发自身抵抗力杀灭癌细胞

金川指出，其实“免疫细胞治疗”并不是什么新鲜事物，它在国内外开展的时间已有三四十年。

金川说，免疫细胞治疗等生物治疗与传统化学药物最大的区别在于，前者主要是利用人体自身的免疫细胞而不是传统的化学药品来杀伤肿瘤细胞的。而且与传统方法相比，生物治疗的针对性更精确，“它瞄准的是肿瘤细胞本身，不会‘伤及无辜’。”

而具体到免疫细胞治疗，其方法就是从患者的外周血中采集单个核细胞，然后送到专业的实验室内进行培养、扩增、诱导，刺激细胞中的肿瘤抗原，从而获得能识别癌细胞的DC细胞和具有高杀瘤活性的CIK细胞，然后如同打点滴一样分次回输到患者体内。这样一来，这些携带了“秘密武器”的免疫细胞就能有效抑制肿瘤细胞生长、消除转移病灶，达到预防和控制肿瘤复发和转移，实现延长患者生存期、提高患者生活质量的多重目标。“值得一提的是，免疫细胞治疗目前已经纳入了广州的医保。”

适应症：

晚期癌症患者获益不大