化学品毒性化学分析范文

1临床资料

60例病人均为我院急诊科抢救病人，均有明确的吞服有机磷农药乐果病史，血浆胆碱酯酶活性均低于30%，无基础疾病。随机分为常规治疗组和“阿托品化定量观察指标”组（量化组）。入选60例病人就诊前均曾自行催吐，未予其他治疗，就诊时间均小于1小时。患者年龄、性别、服毒量见表1，经统计学处理差异无显著性（P>0.05）

表1两组病例一般情况比较

2治疗方法

所有病人常规予以清洗去毒，脱去污染衣物，彻底清洗污染皮肤、毛发和指甲，彻底、反复洗胃、导泻，按病情给予阿托品、氯磷定并维持72小时以上至血浆胆碱酯酶活性恢复至大于70％。部分病人给予透析治疗。

3阿托品化判断标准及阿托品过量判断标准

3.1常规治疗组:阿托品化主要指征是口干、皮肤干燥、颜面潮红、瞳孔散大、心率加快90~100次/min、体温轻度升高、肺部啰音消失。

3.2量化组（见表2）

表2阿托品化定量观察指标记分表

小于6分为阿托品不足，加大用量；6~9分已达阿托品化，控制用量；大于9分应警惕阿托品过量或中毒，减量[1]。

3.3阿托品过量判断标准：中毒早期语言及运动中枢高度兴奋、谵语、幻觉与精神症状，易识别，停药或减量后恢复较快；中毒晚期中枢高度抑制、昏迷、脑水肿甚至出现呼吸循环衰竭，瞳孔极度散大，眼底静脉血管显著扩张。

4疗效观察指标

4.1动态观察临床症状、体征、血浆胆碱酯酶活性，记录阿托品过量中毒发生率。

4.2疗效标准：痊愈：临床症状、体征消失，血胆碱酯酶活性恢复正常；好转：临床症状、体征消失，血胆碱酯酶活性接近正常；无效：抢救治疗无效或患者死亡。

5结果

两组病人疗效对比见表3，阿托品过量发生率对比见表4

表3两组病人疗效比较

表3结果表明常规治疗组改善率60.00%，量化组改善率83.33%，经X2检验，P

表4两组病人阿托品过量发生率比较

表4结果表明常规治疗组阿托品过量发生率60.00%，量化组阿托品过量发生率16.67%，经X2检验，P

6讨论

急性有机磷农药中毒(AOPP)是临床常见急症，死亡率高。阿托品是AOPP时最常用的抗胆碱药。其周围作用主要是竞争性阻断M-胆碱能受体（M-ChR），拮抗乙酰胆碱引起的毒蕈碱样效应。大剂量时对中枢M-ChR也有作用，对中枢N-胆碱能受体（N-ChR）无作用，对周围N-ChR作用极弱[2]。阿托品使用原则是迅速、适量、反复用药，在短时间内达到阿托品化[3]。关于阿托品的使用，长期的临床实践，按照教科书及有关文献，阿托品的使用并不完善，特别是对于重度口服中毒剂量偏低。受个例超大剂量抢救成功的影响，近年来，阿托品有滥用趋势。每天上千甚至上万毫克者非个别现象[4]。引起的过量、中毒、死亡现象屡见不鲜[5]。中毒发生率为40%~60%[6]，病死率为18.3%[7]。传统疗法治愈率低（20%~70%），病死率高（20%~80%）[8]。影响阿托品用量的常见原因:对于阿托品指征的掌握过于死板苛刻；对阿托品中毒认识不足；阿托品化后维持剂量的掌握及患者有其他基础病因是影响阿托品用法及用量的最常见的原因。阿托品化主要指征是口干、皮肤干燥、颜面潮红、瞳孔散大、心率加快、体温轻度升高、肺部啰音消失。临床实践中，不可能所有指征都出现[9]。瞳孔扩大和颜面潮红不是阿托品化可靠指标。对于阿托品化中口干、皮肤干燥、面色潮红、肺部罗音消失、HR100次/min左右应进行综合衡量分析，因个体差异不同，特别是患者具有其他基础病因时，切忌有某一症状、体征不符而盲目增大阿托品用量。阿托品化可靠指标是口干、皮肤干燥和心率90~100次/min[10]。“阿托品化简化指标”客观可靠，有利于抗胆碱药物合理应用[11]。阿托品化定量观察能更好指导阿托品应用。

参考文献

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化学品毒性化学分析范文

[关键词]甘遂；醋甘遂；代谢组学；1H-NMR

[收稿日期]2013-06-18

[基金项目]国家自然科学基金项目（21121091）；国家重点基础研究发展计划（973）项目（2011CB505300-03）

[通信作者]*李建新，教授，博士生导师，Tel/Fax：（025）83686419，E-mail：

甘遂为大戟科大戟属植物甘遂Euphorbiakansui的干燥块根，具有泻水逐饮、破积通便之功，常用于治疗水肿、腹水、大小便不利等证。特别对晚期肝硬化腹水[1]、急性肠梗阻[2]、重症胰腺炎[3]等重症恶性疾病有很好的疗效。但甘遂为有毒中药，《神农本草经》将其列为下品，属峻下药，这大大限制了甘遂的临床应用。本课题组及其他研究小组分别发现甘遂可以通过阻碍大鼠体内三羧酸循环、谷氨酰基循环、糖代谢、氨基酸代谢等产生肝肾毒性，且其毒性具有蓄积性[4-5]。传统中医认为醋制能降低甘遂的毒性，但目前还没有系统的研究报道醋制是通过怎样的途径来解甘遂之毒性的。

代谢组学[6]是现代系统生物学的重要组成部分，是继基因组学和蛋白质组学之后新近发展起来的一门实用性学科。因其能够快速、有效地分析多条代谢通路，帮助定位靶组织及判定毒副作用程度，寻找出相应的生物标志物，21世纪以来已广泛应用于药物毒性的研究[7]。本文主要采用基于1H-NMR的代谢组学方法，从代谢物水平上来阐述醋制对甘遂毒性的缓解作用。

1材料与方法

1.1仪器试剂BrukerAvanceⅡ300核磁共振仪（瑞士Bruker公司）；生甘遂、醋甘遂购自南京中医院中药房，经南京师范大学生命科学院龚祝南教授鉴定；重水，氘代3-三甲基甲硅烷基丙酸钠盐（TSP）购自Sigma公司；水为自制纯净水；其他试剂均为分析纯。

1.2动物30只雄性SD大鼠，体重（150±10）g，购于南京中医药大学动物实验中心，随机分为3组，每组10只，分别为对照组、生甘遂组和醋甘遂组。将室内保持12h光照，12h避光循环饲养，给予标准饲料和饮用水，且控制室内温度（25±2）℃，相对湿度40%左右。将大鼠单独饲养于代谢笼中3d以适应环境，实验前禁食12h。

1.3提取物的制备生甘遂、醋甘遂称其质量后加入6倍量的水，浸泡2h后煎煮2次，每次0.5h，提取液合并，旋转蒸发，浓缩至药物质量浓度为1.8g・mL-1（按生药量计）。

1.4动物实验及样品收集实验组每天早晨8点以生甘遂提取物、醋甘遂提取物9g・kg-1・d-1（按生药量计）连续灌胃7d，对照组每天给予相应量的生理盐水，收集白天尿液，第8天每组均处死一半，采集肝脏，每组剩余大鼠不再灌胃，继续收集白天尿液7天，第15天处死，采集肝脏。尿液离心除沉淀，-20℃保存至核磁分析。肝脏分为2份，1份-20℃保存至核磁分析，另1份进行组织切片分析，由东南大学医学院病理学系完成。

1.5样品预处理与1H-NMR测定取500μL尿样，加入350μL磷酸缓冲溶液（0.2mol・L-1NaH2PO4-0.2mol・L-1Na2HPO41∶1，pH7.4）以消除pH变化导致的谱图不稳定，充分混匀后4000r・min-1离心10min。取450μL上层清液，移入NMR样品管，加入50μL含0.1%TSP的D2O，D2O用于锁场，TSP作为化学位移内标（δ=0）。取250mg左右肝脏组织，加入2mL50%乙腈溶液，在冰水浴中匀浆。匀浆液4000r・min-1离心30min，取上清液，真空冷冻干燥，重溶于0.5mLD2O（含0.1%TSP）中，移入NMR样品管。样品测试在BrukerAvanceII300核磁共振仪上进行，使用修改了脉冲序列（zgpr）的程序采集样品1H-NMR谱图：水峰饱和（pl9=63dB，d1=2s），脉冲间隔为15s。每个样品空扫2次，采样64次。所有实验均在5mm的探头中进行，测试温度维持在300K。

1.61H-NMR数据的处理与分析使用ACD1DNMRManager（AdvancedChemistryDevelopmentInc.，Version6.00）将1H-NMR谱图按0.04ppm分段积分。尿液：首先除去水峰以及尿素峰所在化学位移（δ=4.2～6.0ppm）。由于谱图6.0ppm以上区域变化较小，而且在0.0～4.2ppm可见相关信号，0.0～0.2ppm仅包含TSP峰，所以选择0.2～4.2ppm的谱图进行分段积分。肝脏提取物：首先除去水峰（4.75～5.15ppm），将谱图变化较大的区域0.5～5.5ppm用ACD1DNMRManager按0.04ppm分段积分。将ACD1DNMRManager导出的数据取每段积分值与所有积分值之和的比值作为主成分分析使用的变量（Variables）。将数据导入SPSS（SPSSInc.，Version11.5.0）进行主成分分析（PCA），经过正交矩阵变换，得到因子得分图（scoreplot）和因子载荷图（loadingplot）[4]。通过因子得分图可以直观地看出样品的分类情况，得分图中实验组样品点与空白对照组样品点间的距离越大，说明实验组大鼠给药后与正常大鼠相比，其内源性代谢产物谱发生的紊乱越严重，也就是说其毒性越大。因子载荷图用于解释造成样品间差异的原因[8]。

2结果

2.1肝脏组织切片分析肝脏经4%中尔马林液固定、组织修切、石蜡包埋、常规切片、HE染色、酒精梯度脱水、透明、封片、最后进行光学显微镜观察。观察结果显示在本实验剂量下甘遂及醋甘遂的水提取物对大鼠肝脏没有造成损伤，结果与前人报道的甘遂水提取物没有毒性是一致的[9]。

2.2尿液谱图分析笔者已经报道了生甘遂组的尿液1H-NMR谱图与对照组相比差异很大，主要差异体现在第2周尿液中小分子代谢物含量发生了变化：乳酸盐（lactate）、醋酸盐（acetate）、牛磺酸（taurine）、甘氨酸（glycine）、丙氨酸（alanine）的含量升高；而柠檬酸盐（citrate）、2-氧代戊二酸盐（2-OG）、琥珀酸盐（succinate）、马尿酸盐（hippurate）含量下降[4]。醋甘遂组的尿液1H-NMR谱图变化与生甘遂组相似，也体现在第2周（图1）。第10～14天，乳酸盐、醋酸盐和甘氨酸含量明显升高，丙氨酸含量也有所上升；第11～14天，观察到柠檬酸盐、2-氧代戊二酸盐、琥珀酸盐即三羧酸循环中间产物含量急剧下降；第11天，观察到牛磺酸含量升高；整个第2周，马尿酸盐的含量都处于一个很低的水平。仅从谱图上观察，与生甘遂组相比，醋制组中与毒性相关的小分子变化较小。

图1醋甘遂组大鼠尿样1～14d1H-NMR图与对照组的比较

Fig.1Thecomparisonoftypical1H-NMRspectraofurinesamplesofVEK-treatedratstothecontrol

2.3尿液谱图PCA分析将每组大鼠每天尿液1H-NMR谱图分段积分数据取平均值后经PCA分析[10]，因子得分图中每组为一周数据，每天1个得分点，共7个得分点（图2）。图2A显示，生甘遂组、醋甘遂组在第1周与对照组样品不能分开，这与1H-NMR谱图分析结果一致，说明在本实验剂量下生甘遂、醋甘遂在实验的第1周还没有对大鼠产生明显的毒性。但与此相反，在实验的第2周（图2B），生甘遂组表现出很强的毒性，其得分点与对照组明显的分离开来[4]；醋甘遂组虽然也能和对照组区分开来，但是其得分点居于生甘遂组和对照组之间，说明醋制的确能降低甘遂的毒性。因子载荷图（图2C）显示，生甘遂、醋甘遂的毒性主要体现在造成大鼠代谢产物乳酸盐、醋酸盐、牛磺酸、甜菜碱（betaine）和三羧酸循环中间产物的变化。

A.第1周尿样PCA分析所得因子得分图；B.第2周尿样PCA分析所得因子得分图；C.为第2周尿样PCA分析因子载荷图，显示引起第2周PCA得分图中差异的主要代谢物。

图2大鼠灌胃生甘遂、醋甘遂后尿样的1H-NMR谱图数据PCA分析

Fig.2Principlecomponentmapsofanalysisof1H-NMRdataofurinesamplesofEKandVEKgroup

2.4肝脏提取物谱图分析与对照组相比，第8天（图3A），生甘遂组、醋甘遂组明显可见肝糖原（glycogen），α-葡萄糖（α-glc），β-葡萄糖（β-glc）升高，说明肝脏中糖类蓄积。大鼠灌胃甘遂后，虽然尿液1H-NMR谱图在给药1周期间没有体现出明显的毒性，但肝脏水层萃取物1H-NMR谱图已经出现了变化，说明甘遂给药1周时，肝脏内已开始有了一些毒性反应：能量代谢过程发生了异常；糖代谢发生障碍。第15天的情况与第8天相比，毒性不但没有得到缓解，而是进一步恶化，两实验组中肝糖原（glycogen），α-葡萄糖（α-glc），β-葡萄糖（β-glc）持续升高，糖类进一步蓄积（图3B）。

图3大鼠灌胃生甘遂、醋甘遂后第8天（A）、第15天（B）肝脏提取物1H-NMR图

Fig.3Typical1H-NMRspectraofaqueouslivertissueextractsatday8（A）andday15（B）

将肝脏提取物1H-NMR谱图分段积分数据经PCA分析，因子得分图（图4A）显示，生甘遂组在第8天就与对照组明显分离开来，到第15天时（图4B），分离趋势更加明显。而醋甘遂组虽然也能与对照组区别开来，但其程度比生甘遂组要低得多，这也说明了醋制的确能降低甘遂的毒性。

A.第8天肝脏提取物PCA分析所得因子得分图；B.第15天肝脏提取物PCA分析所得因子得分图。

图4大鼠灌胃生甘遂、醋甘遂后肝脏提取物1H-NMR谱图数据PCA分析

Fig.4Principlecomponentmapsofanalysisof1H-NMRdataofaqueouslivertissueextractsofEKgroupandVEKgroup

3讨论

生甘遂是一种有毒中药，但其毒性过程并不明确。此前对于甘遂毒性的研究主要采用传统毒理学研究方法（如血样测定、半数致死剂量LD50、病理组织切片等），集中于其急性毒性的研究[11-15]。但这些方法在研究中药毒性的过程中显示出一定的局限性。比如有些中药可能测不出LD50，也不能观察到病理组织的损害，但在器官内部细胞分子水平已经发生了毒性引起的生物化学变化。另外，对于大多数有毒物质来说，所引起的病理损坏和生物化学变化发生在不同的时间，两者并没有线性关系。

代谢组学方法，因其可以在药物毒性产生的早期评估到它的潜在毒性，并且代谢物中的小分子往往对应于特定部位的损伤，对于深入了解代谢过程和确定有毒物质的作用部位有独特的优点。

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1H-NMRbasedmetabonomicapproachtoevaluatedetoxification

effectofvinegar-processedEuphorbiakansui

LIUYu-mei1，2，HUIRong-rong1，HECui-cui1，DUANJin-ao3，LIJian-xin1*

（1.SchoolofChemistryandChemicalEngineering，NanjingUniversity，Nanjing210008，China；

2.DepartmentofPharmacy，TongrenPolytechnicCollege，Tongren554300，China；

3.JiangsuKeyLabortaryofTraditionalChineseMedicineFormulaeResearch，

NanjingUniversityofChineseMedicine，Nanjing210046，China）

[Abstract]Euphorbiakansui（EK）isatoxicherbaldrug，andoftenusedaftervinegar-processingtoreduceitstoxicity.Inpresentstudy，a1H-NMRbasedmetabonomicapproachwasusedtoevaluatethedetoxificationeffectofvinegar-processedEK.ThewaterextractsofEKandVEKwereadministeredorallytomaleSDratsatdosesof9g・kg-1・d-1for1week，respectively，andonemoreweekobservationwasfurtherconducted.Thecontrolgroupwasorallygivenwithsaline.Histopathologicalstudiesofliversamplesonthe8thand15thdaywereconducted，andthemetabolitesofraturineandliverwereanalysedby1H-NMR.HistopathologicalstudiesofliversamplesfromEKandVEKtreatedratsshowednonegativeimpacts.Inmetabonomicanalysesofurines，changesofmetabolitesindicatedliverdamages，kidneylesionsandimbalanceofgutmicrobesinthesecondweek.VEK-treatedratsshowedaquitelowertoxicitycomparedwithEK-treatedones.ThepresentstudyrevealedthatthemetabonomicapproachmightbehelpfulfortheevaluationoftoxicityofEKanddetoxiceffectofVEK.

化学品毒性化学分析范文篇3

[关键词]刑事；毒物分析；固相萃取技术；应用探讨

[DOI]1013939/jcnkizgsc201718280

1刑事毒物分析研究现状

刑事毒物分析是公安机关对或者是毒物通过分析化学的方法对其进行定量分析的学科。刑事读物分析早起主要以医学中检测中毒死亡的毒物演变并拓展到现如今解决制造、加工中使用的管制的毒化学品的检测。

通过大量的实践我们发现，在涉毒现场当中，获取到的涉毒物证会呈现不同的形态、类型等，而在这些物证当中的组成部分也有着各种各样的差异，如何才能够对现场当中物证的信息进行高效的挖掘，是相关人员一直都在努力研究的重点问题。由于在实际的样品分析过程当中，常常并不具备明确的指向性，无法确定是哪一种毒物造成的结果，而在大多数的案件当中，物证当中并具备较高的毒物含量，因此，对样品进行分离净化一直是刑事读物分析过程当中的重要环节，这也要求要根据可能的毒物来对前处理防范进行合理的选择。针对案件当中的实际需求，研究转移性强、有效的研究方法开发则变得越加重要，对于实现现场物证的快速测定也有着十分重要的意义。

现如今，虽然在实验室当中已经具备了十分相近的仪器，同时也有样品常规提取技术，但是现场快速的提取技术仍然存在着一定的问题，例如对价格低廉且无目标物残留的样品能够简便操作的装置开放。因此，这就需要引入国际当中的先进技术手段来对物证进行更加高效的富集。

气液色谱法因为其具有高效快速分的特定，现如今已经成为了应用最为广泛的分析方法，几乎在所有的科学领域当中都逐渐地得到了应用，而在刑事读物的分析过程当中也不例外。在刑事技术的领域当中，样品有着多样性的特点，且有着十分复杂的组成部分，而物证当中的重要组分却含量极低，由于样品的特殊性，因此也对分析技术提出了全新的要求，这也成为了相关工作人员门都在研究的重要课题。

2固相萃取

固相萃取法也叫作SPE，是一种带有功能集团的固体吸附剂作为萃取剂的样品前处理方法。固相萃取发的原理是当液体的样品流过固相萃取装置的过程当中，液体的样品会吸附在固定相当中，最终实现对目标组分的萃取，利用这种方法，也能够将复杂机体当中的杂志进行去除，从而最终得到目标组分。现如今，固相萃取填充柱、固相萃取填充膜等是比较常用的固相萃取装置。

固相萃取技术具有操作简单、检测速度快的特点，且在对涉毒物证的分析过程当中，利用固相萃取法所需要的溶剂也比其他方法较少，另外固相萃取法并不会被乳化所干扰，因此，与其他的仪器固相萃取法能够具备较高的融合性，并且能够对目标组分更加高效地进行富集。随着科技的不断发展，固相萃取技术正呈现越来越优秀的效果。

3固相萃取在读物分析中的应用

在刑事案件当中，一般的毒物分析对象包含生物体液、非生物检材等多种多样的种类，除此之外，由于毒物性质也各不相同，因此在样品前处理的过程当中，任何一个环节都会对结果造成相应的影响，这就需要在实际的检测过程当中，根据检测对象的不同来对检测方法进行科学、合理的选择。

31水中农药残留

在一些城市当中，由于邻近湖泊，因此有着较为发达的淡水养殖业，有时也会发生鱼塘投毒案件。但是，农药在水中的残留量是基地的，想要对其进行高灵敏度的检测，就必须对涉毒物证的样品进行预先的处理。

2016年5月，在A市的一所生态农业园鱼塘当中，承包人发现鱼塘当中突然死亡了两万斤鱼，造成了十分巨大的损失，承包人怀疑有人在自家的鱼塘当中投毒，于是便向警方报案。在该实验当中，在干烧杯当中取200毫升的水样，并在加入6科醋酸钠之后进行了混匀搅拌，此后利用01M盐酸将水样的PH值调节为6，并预先利用固相萃取柱抽干小柱去除离心，最后加入丙酮进行洗脱，对洗脱完成之后的洗脱液利用氮气对其进行吹干，最后采用了GC-MS的方法对其进行分析，发现其中包含甲氰菊酯的成分。

32生物组织的毒物筛查

生物组织由于会受到蛋白质等成分的影响，因此与生物体液相比，有着更加复杂的前处理过程，如果单纯地利用传统的固相萃取方式，难以对萃取柱进行独处，最终还可能会对回收率造成一定的影响。因此，在毒物的分析过程当中，使用固相萃取技术质检应先对样品进行预处理，在预处理之后在进行相应的固相萃取。

在实际的工作过程当中，应对不同的溶剂进行选择并对毒物进行浸泡，从而使得毒物当中的蛋白以及油脂能够得到有效的去除，避免这两者对固相萃取柱造成影响，从而使得回收率能够得到有效的保证。在对人脑组织进行分析的过程当中，需要先对其进行超声解冻，最后检测出含有安眠药的成分。而在对肝组织检测时，需要将其剪碎并加入乙腈，在洗脱之后对洗脱液进行吹干，也能够使得回收率得到保证，但仍需要考虑毒物的理化性质。

4固相萃取的未来发展趋势

现如今，科学技术都在快速的发展，而在这样的背景下，固相萃取技术也显示出了十分优秀的性能。目前，我们已知的毒物种类高达数十万，而想要对每一种毒物都进行萃取是十分困难的，虽然已经对不同型号的固相萃取柱进行了开发，但最终的结果仍然受到操作方法等很多因素的影响。但是，在未来当中，科技的不断发展会使得固相萃取在对物证杂志的去除方面呈现更好的效果，并且能够在更加广泛的领域当中得到应用，此外，质谱检测也会呈现更高的灵敏程度，且实际的检测时间也会较之现在变得更短。

5结论

固相萃取是近些年才发展起来的一种毒物分析样品前处理技术，这种技术主要用于对样品的分离以及富集。现如今，社会形势愈加复杂，而想要使得毒物萃取、检测的效率得到有效的提高，并达到高灵敏、速度快等效果，就需要对处理技术进行选择，在毒物分析过程当中，将固相萃取与色谱质谱进行有机结合，能够保证检测的灵敏程度，从而更好地实现对毒物的筛查。

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