水产养殖消毒方法范文

关键词：草石蚕（StachyssieboldiiMiq）；外植体；消毒；不定芽增殖

中图分类号：Q943.1文献标识码：A文章编号：0439-8114（2016）24-6601-03

草石蚕（StachyssiebordiiMiq.）又名甘露子、宝塔菜、地牯牛、地蚕等，为唇形科水苏属多年生宿根草本植物[1]，是中国的特色蔬菜之一[2-4]。草石蚕原产于中国北方，现重庆、山东、江苏、河北、内蒙古、陕西、广东等地均有种植。草石蚕具有十分丰富的营养价值，每1kg草石蚕中含蛋白质55g、脂肪3g和碳水化合物203g[5]。宋建清等[6]报道草石蚕中糖类含量高达12.47%，磷元素含量高达11.07mg/g，是一种天然的磷源。草石蚕具有重要的药用价值，《本草纲目》称其“功能近似冬虫草”、既可为菜为药，又可充果，《陆川草本》载有：“滋养强壮，清补肺金，功类冬虫草，治身体赢瘦，虚劳咳嗽，小儿疳积”，《贵州草药》记载：“清肺解表，全草治风热感冒”。草石蚕中含有丰富的水苏糖，具有润肺益肾、滋阴补血的功能，可治疗气喘、肾虚腰痛、淋巴结核、肺结核咯血等病症[5]。

草石蚕为无性繁殖，常常携带大量病毒，并已成为草石蚕产量和品质下降的主要原因，因此草石蚕组织培养脱毒苗势在必行。无菌系的建立是组织培养的首要环节，但草石蚕植株（叶、茎）表面长有许多绒毛，容易携带大量污染微生物而不易消毒，常出现消毒时间短而导致污染；消毒时间长而导致外植体受到消毒剂毒害而发生褐化、死亡现象。目前关于草石蚕外植体消毒方法和芽增殖培养基方面的研究鲜见报道。因此，本试验针对草石蚕组织培养中存在的这些关键问题，研究了草石蚕外植体的消毒方法和芽增殖培养基适宜配方，为组织培养快速繁殖和脱毒苗生产提供技术支撑。

1材料与方法

1.1试验材料

试验材料为贵州省务川仡佬族苗族自治县主栽草石蚕品种。

1.2试验方法

1.2.1草石蚕外植体消毒方法的探索用添加洗洁精的自来水浸泡草石蚕叶片和茎尖1～2h，将其用清水冲洗干净。接着在75%乙醇中消毒2s，用无菌水冲洗3次后，转入0.1%HgCl2或1%NaClO（有效Cl浓度）溶液中分别杀菌处理5、10、15和20min，用无菌水漂洗5～6次，将已灭菌的叶片（切成1cm×1cm方块）和茎尖接种到盛有MS培养基（添加琼脂粉7g/L和蔗糖30g/L，pH为6.0）的三角瓶中，每个处理接种6个三角瓶，每瓶接种2个外植体，3次重复。接种后将材料温度25℃、光照时间14h（光照强度6600lx）培养，培养40d后统计外植体污染和褐化情况。

1.2.2草石蚕丛生芽增殖培养基的筛选将消毒的茎尖接种到增殖培养基上培养。增殖培养基采用1.0、3.0、5.0mg/L6-BA（A），0.3、0.5、0.7mg/LNAA（B），0.5、1.5、2.5mg/LGA3（C）3因素3水平L9（34）的正交试验设计，研究培养基中6-BA、NAA和GA3对不定芽增殖的影响。培养40d后观察统计芽增殖生长情况。增殖系数的计算公式为：增殖系数=增殖芽数目/接种芽数目。

1.3数据处理分析

采用DPS（7.05）软件对数据进行处理分析，LSD方法进行方差分析。

2结果与分析

2.1不同消毒剂对草石蚕外植体的消毒效果

由表1和表2可知，以草石蚕茎尖为外植体时，当0.1%HgCl2溶液消毒5min时，污染率达100.0%，污染程度较重，并且茎尖出现了轻度褐化。当0.1%HgCl2溶液消毒10min时，茎尖污染率和消毒5min处理之间差异不显著，但是褐化率加重，差异极显著。当0.1%HgCl2溶液消毒15min时，污染率进一步下降，但茎尖全部褐化。采用1%NaClO溶液消毒茎尖5min时，污染率为20.0%，没有褐化现象。当消毒时间为10和15min时，茎尖无污染发生，也没有出现褐化现象。当消毒时间为20min时，虽然无污染发生，但15.0%茎尖出现了褐化现象。因此，以草石蚕茎尖为外植体时，1%NaClO溶液比0.1%HgCl2溶液消毒效果好，1%NaClO溶液适宜的消毒时间为10～15min。

以草石蚕叶片为外植体时，不同的0.1%HgCl2溶液消毒时间均没有完全消除叶片污染现象，并且随着消毒时间的延长，褐化变得越来越严重。采用1%NaClO溶液消毒5和10minr，无褐化现象，但污染率分别为14.3%和5.7%。1%NaClO溶液消毒15min时既无污染发生，又无褐化现象。1%NaClO溶液消毒20min时无污染发生，但有褐化现象，褐化率为37.1%。由此可知，以草石蚕叶片为外植体时，采用1%NaClO溶液比0.1%HgCl2溶液的消毒效果好，NaClO溶液最佳的消毒时间为15min。

综上所述，无论对于茎尖或叶片哪种外植体，1%NaClO溶液比0.1%HgCl2溶液的消毒效果好。以茎尖为外植体时，NaClO溶液适宜的消毒时间为10～15min；以叶片为外植体时，NaClO溶液适宜的消毒时间为15min。

2.2草石蚕不定芽增殖培养基的筛选

不同浓度的6-BA、NAA和GA3组合对草石蚕不定芽增殖的效果不同（表3）。处理7（6-BA、NAA和GA3的浓度分别为5.0、0.3和1.5mg/L时）的增殖系数最高，为6.6，并且芽粗壮，长势好；处理3的增殖系数次之，为4.5；处理4的增殖系数第三，为4.3。NAA、GA3和6-BA增殖系数的极差值分别为4.3、4.0和2.5，NAA对草石蚕不定芽增殖系数的影响最大，GA3次之，6-BA的影响最小。

3小结与讨论

植物组织培养过程中，若不能有效地对外植体进行消毒，必将影响无菌系的建立和组织培养的顺利开展。在自然生长条件下，外植体表面携带大量污染微生物，因此外植体消毒就成为组织培养过程中首要步骤[7]。不同植物在自然条件下所携带的污染微生物有所不同，所采取的消毒方式也不尽相同。所以，消毒方法的选择对于植物组织培养的成功与否起着至关重要的作用。王小敏[8]以薄荷、留兰香和椒样薄荷的茎尖、茎段和幼嫩叶片为外植体进行消毒，结果表明，最适的消毒处理为先用75%乙醇处理30s，再用0.1%HgCl2处理10min或0.2%HgCl2处理8min。张秀珍[9]研究东北百里香茎段得出最适宜的消毒方法是75%乙醇30s+0.1%HgCl2处理8～10min。董玉梅等[10]研究了迷迭香叶片消毒方法。周川云[11]分别以紫苏种子、子叶、下胚轴和叶片为外植体，采用乙醇、HCl2、NaClO不同浓度、不同处理时间进行外植体消毒，分别获得了不同外植体适宜的灭菌条件。本试验以草石蚕不同外植体为试材，开展了HgCl2与NaClO两种消毒剂对草石蚕消毒效果的研究，结果表明，NaClO溶液比HgCl2溶液消毒效果好，以茎尖为外植体时，75%乙醇2s+1%NaClO10～15min的消毒效果最好；以叶片为外植体时，75%乙醇2s+1%NaClO15min的消毒效果最佳，其污染率均为0，并且未发生褐化现象。与前人研究相比，本试验通过缩短乙醇的处理时间来减少对外植体的损害，同时采用NaClO溶液以避免HgCl2消毒液难以清除问题。

在植物组织培养过程中，激素虽然用量很少，但是对植物组织培养起着显著的调控作用[12，13]。细胞分裂素类可促进细胞分裂和器官分化，促进芽分化和生长，适宜的细胞分裂素浓度对不定芽增殖起着重要作用。生长素类主要作用有促进细胞分裂和伸长，诱导愈伤组织的产生，诱导、促进生根，还会诱导某些植物胚状体的形成。赤霉素类主要作用是促进细胞生长和打破休眠，在器官形成后，可促进器官或胚状体的生长。在组织培养过程中，通常将生长素类、细胞分裂素类和赤霉素类等植物生长调节剂配合使用，以诱导不定芽增殖，获得较多的增殖芽数目，提高组培苗质量。张国裕等[14]对银条芽增殖培养基进行了研究，发现MS+6-BA4.5mg/L+GA31.0mg/L为最佳芽增殖培养基。[15]研究了黄芩组织培养技术，发现黄芩丛生芽的增殖培养基以MS+6-BA0.2mg/L+NAA0.2mg/L为佳，且芽长的大且粗壮。沙红等[16]进行了留香兰的组织培养试验，得出其最佳增殖培养基MS+6-BA0～0.1mg/L+IBA0～0.04mg/L。史华平等[17]研究得出紫苏继代增殖培养基为MS+6-BA2mg/L+NAA0.1mg/L。本试验研究发现草石蚕不定芽增殖的最佳培养基为MS+6-BA5.0mg/L+NAA0.3mg/L+GA31.5mg/L，增殖系数是6.6；本试验草石蚕不定芽增殖培养基研究结果与张国裕等[14]结果比较一致，其原因是两者试验材料相似。徐梦等[18]研究了甘露子的不定芽增殖系数为5.6，本试验比其提高了17.9%。

参考文献：

[1]郑华，周月英.浙江蔬菜资源（下）[J].上海蔬菜，2001（1）：9-10.

[2]黄善香.中国种植养殖技术百科全书[M].海口：南方出版社，1999.

[3]中国科学院中国植物志编辑委员会.中国植物志（第六十六卷）[M].北京：科学出版社，1977.18-20.

[4]中国科学院北京植物研究所.中国高等植物图鉴（第三册）[M].北京：科学出版社，1972.

[5]廖玉平.A级绿色食品草石蚕标准化生产栽培技术[J].中国园艺文摘，2012（1）：112-113.

[6]宋建清，叶萌，张议方，等.三种虫草蝙蝠蛾幼虫野生食材的营养成分分析[J].北方园艺，2011（9）：157-159.

[7]正华.木本植物组织培养及其应用[M].北京：高等教育出版社，1986.

[8]王小敏.薄荷属植物的组织培养与快速繁殖技术研究[D].南京：南京农业大学，2007.

[9]张秀珍.东北百里香组织培养再生体系的建立及化感作用研究[D].哈尔滨：东北林业大学，2010.

[10]董玉梅，李正楠，钱成，等.迷迭香叶片愈伤组织诱导及再分化培养[J].分子植物育种，2012，10（2）：189-194.

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[13]张红晓，康向阳，沈燕，等.白刺组培快繁的研究[J].经济林研究，2003，21（4）：60-63.

[14]张国裕，程智慧，李娟，等.银条不定芽诱导及高效增值体系的建立[J].西北农林大学学报（自然科学版），2004，32（2）：49-52.

[15]王丹.黄芩组织培养与快速繁殖研究[J].现代化农业，2009（1）：18-20.

[16]沙红，廖康.药用植物留香兰的组织培养研究[J].新疆农业大学学报，2003，26（1）：10-12.

水产养殖消毒方法范文

近几年由于产业结构调整和国家加大了对畜牧业的投入,畜牧业迅速发展,各类规模养殖场(小区)相继出现。如何建立行之有效地动物防疫制度,保障畜禽健康生长,已成为所有养殖场的首要问题。为此,笔者就我县养殖小区的防疫管理进行一些分析和探讨。

1养殖小区防疫管理现状和问题

(1)小区基础设施建设不规范、不科学。我县规模养殖小区大多数是利用居民旧房、旧厂房改造而成,缺乏合理的整体规划,生活区与生产区混在一起,净污道不分,无隔离、消毒道,隔离舍,无害化处理设施不健全,往往是发生疫病后,在生活区与生产区之间设一个临时消毒池(带),没有疫情时也就没有消毒池,畜舍离干线公路、居民区太近,甚至混居。

(2)人员素质较低,防疫知识缺乏。规模养殖(小区)的养殖户主要是由来自不同职业的人员组成,人员素质参差不齐,对养殖业的高风险认识明显不足,缺乏必要的防疫知识和防病意识,短期投机意识十分强,普遍存在重饲养轻管理、重治疗轻防疫的思想;缺乏消毒意识、免疫监测意识、引种隔离检疫意识,对疫病不能及时准确做出诊断,自问疫情。养殖户多凭自己养殖经验自我诊断用药,诊断、用药欠科学合理,有的诊断不准确、不全面、不及时,造成疫情扩大和蔓延。

(3)饲养管理不科学。不同日龄、批次混合饲养或同一圈舍以简易网隔开不同日龄、不同批次饲养比较普遍,没有实行全进全出制度。通风不良、湿度过大、饮水不洁、饲养密度过大等问题比较突出,导致畜禽机体长时间处于应激状态,免疫力下降。人员、车辆随意进出,从而带入病原,增加了感染疫病机率;缺乏引种隔离观察制度,引种后直接合群饲养,导致疫情发生;缺乏隔离治疗制度,个别畜禽发病后不能及时进行隔离治疗,导致疫情扩散;缺乏免疫和消毒效果监测,一切凭免疫程序和免疫时间推算免疫水平,盲目性较大。不能坚持自繁自养、引种检疫程序不全,现在只有少数养殖小区坚持自繁自养,绝大多数养殖小区的畜禽都是靠从外地引种,引种检疫程序又不到位,以致引发小区疫情频发。

(4)免疫程序、方法不科学。贪图价格便宜,选购中试产品,甚至是质量低劣的疫苗;购苗不注重标签标注的有效期,忽视疫苗保存条件,购进反复冻融冻干疫苗或破乳的油乳剂疫苗;只看重一种病的预防效果,忽视其副作用,控制了该病,却控制不住其他病。制定免疫程序全凭厂家或药店推荐,而不是根据本地实际和参考抗体监测结果制定;制定的免疫程序随意更改,免疫程序不能严格执行。一次接种多种疫苗,相互干扰,免疫效果不好。在没有联苗的情况下,同时接种2种或2种以上的疫苗,尤其是猪瘟和猪口蹄疫疫苗同时接种,免疫效果难以保障。偏重饮水免疫,如在家禽免疫中,为图省事,免疫疫苗全都是采取饮水免疫,饮水免疫时直接采用自来水,氯含量过高导致疫苗效力下降。饮水器过少,停水时间过长或过短,导致部分禽只未饮用到足量的疫苗水。点眼、滴鼻、刺种免疫存在问题。一是疫苗稀释后,不能按规定时间用完;二是稀释疫苗时不能根据滴管和刺种针的变化而改变稀释液的量,导致稀释过度,超过规定的免疫份数而导致接种剂量不足。肌肉注射时由于操作不规范,往往导致接种处化脓,形成包囊,疫苗被包裹在其中或变质,起不到免疫效果。

(5)消毒药物选购不重视质量,消毒制度不规范。现在市面上的消毒药种类繁多,其中夹杂着一些伪劣药品,稍不注意就会误购;不坚持消毒制度或没有消毒制度,偶尔消毒一下或在区内有疫情发生时消毒一下,没有定期进行消毒。重视化学消毒轻视物理消毒,饲养器具未清洗就消毒;重视舍内消毒轻视外周环境消毒,尤其是边角、杂物堆放处很少消毒或不消毒,消毒不全面、不彻底;忽视对出入圈舍的工作人员或其他人员消毒;消毒药使用不正确,一是消毒液稀释配比不按说明,造成浓度过小或过大;二是使用生石灰直接撒在干燥的地面,而不是稀释成熟石灰,不能很好的发挥消毒作用,且干石灰粉易被风吹散;缺乏带畜禽消毒制度,不能定期进行带畜禽消毒。长期单纯使用一种消毒药,致使某些病原微生物产生抗药性,致使消毒无效。

(6)动物防疫监督乏力。由于基层动物防疫监督机构体制不顺,编制不足,人员素质不高,检测设备不全,加之养殖人员流动性大,不便于管理,难以对养殖小区动物防疫工作进行全方位监督。

2动物防疫制度建立与措施

(1)加强《动物防疫法》宣传,使养殖户牢固树立“预防为主,防疫先行,防治结合,防重于治”的思想,使他们认识到法律的严肃性、疫病的危害性,不按法律程序养殖、经营造成疫情的法律责任,配合防疫人员做好防疫工作;同时最大限度地做好疫病防治技术的宣传和培训,提高其防疫意识和饲养管理水平。

(2)生产区与生活区分开,生产区周围应设立防疫隔离设施;畜禽舍设计、建筑应符合防疫要求;有患病的动物隔离舍和病死动物、污水、污物无害化处理设施、设备。出入口设有隔防和消毒设施、设备;设有与养殖规模相适应的兽医工作室、小型化验室必需的仪器和药品。

(3)科学饲养、科学防疫。实行全进全出制,在全面保证营养需要的条件下,适量添加中草药防病健体添加剂,供给清洁饮水,注意通风换气,有效调控温湿度,合理密度饲养,增强机体对疫病的抵抗力;并定期进行抗体检测,制定符合实际的免疫程序,进行科学防疫。对畜禽实行科学免疫是有效防止疫病发生的重要措施。畜禽场根据本场的疫病史、场周围的疫情、畜禽免疫抗体水平及猪的不同饲养阶段等情况,有针对性地科学制定免疫。选择采购由国家畜牧兽医行政管理部门定点生产的疫苗,加强疫苗保管储存,并由兽医按防疫注射操作规程实行免疫,同时建立生猪免疫档案。有条件的场应及时开展免疫效果监测,并根据监测情况调整免疫程序。

(4)严格门卫制度、人员管理:禁止非本场人员进入并本场饲养人员进入生产区时,必须换工作衣鞋,通过紫外线消毒后,经消毒池入内;本场兽医不得到场外就诊、防疫。工具、车辆要求:场内外工具、车辆要严格分开,应定期消毒;外来工具、车辆一般不予进入;力争做到饲养畜禽全进全出,禁止与其他动物混养;禁止把畜产品带入生产区;把好引种关;引种前了解产地疫病情况,并经动物防疫部门监测检疫,引入后要隔离饲养观察。

(5)认真做好卫生、消毒工作和无害化处理工作。要经常清除舍内粪便、污水、污物等,集中于贮粪池统一进行无害化处理;定期搞好舍外环境卫生清洁、消毒、灭鼠、灭蚊蝇等,禁止小区内饲养犬、猫,防止其他动物进入生产区;定期进行带畜禽消毒,认真做好空圈舍清扫、冲洗和消毒,特别是做好隔离圈舍的消毒。对病死畜禽要及时在指定的地点,根据GBl6548―1996《畜禽病害肉尸及其产品无害化处理规程》和《动物防疫法》进行销毁等无害化处理,坚决禁止将病畜禽、病死畜禽加工成熟制品流入市场。

(6)加大对药品质量的督查力度,严厉打击销售假冒伪劣药品和饲料行为,禁止使用国家禁止的药物、饲料添加剂及其他化合物,切实整顿市场秩序,保护养殖者利益。正确诊断,减少失误。发病初期即聘请有临床经验的兽医技术人员进行初步诊治,同时采集病料送动物防疫监督机构进行实验室确诊,及时采用最佳预防、治疗方案,尽早扑灭疫病;建立健全防疫档案,认真做好检疫申报、疫病检测、引种隔离观察、免疫接种、预防驱虫、消毒和污物处理等的登记工作,完善防疫档案。

水产养殖消毒方法范文篇3

1塘口实施彻底清整消毒

无论是鱼类养殖、虾类养殖，还是螃蟹养殖，在经过一个周期（1年）的养殖行为之后，塘口的塘底都会有许多饲料的残渣、动物排泄物和鱼虾蟹腐尸，多种类型的有机废物在腐烂分解之后变为塘底的淤泥，成为众多种类细菌天然的优质培养基。所以，一旦淤泥超过一定的限度，就应当尽快予以处理。研究资料显示，塘底淤泥清理不及时，会引发银鲫出血病、虾类细菌性病害等多种疾病，对养殖产量及质量均产生严重影响。国内水产养殖中，较为通用的做法，是在实施高密度养殖的塘口，每年对池底的淤积浮泥进行挖除，这样做正是为了铲除细菌滋生的培养基，净化塘口环境。此外，在塘底淤积的浮泥中，寄生虫卵及孢子数量惊人，将其藏身的淤泥清除，能够较大程度地降低侵袭性病害发病率。通常情况下，塘口底部淤泥只要保持在15厘米厚度就行了，这样能够满足水体培育浮游生物的肥度要求，生产天然饵料，同时有效控减细菌滋生与繁殖的密度，所以，在每年对塘口实施清整时均要对塘底多余淤泥及时清理。同时，还要对塘底开展半个月左右时间的曝晒、冰冻，对塘底土质起到改良的作用，并进一步降低塘底淤泥之中细菌、寄生虫卵、孢子等密度，实践证明，塘底经过曝晒和冰冻处理之后，下一季从事水产养殖的发病率会明显降低。但塘底干涸时间过长会出现草荒的问题，也要引起重视。在消毒中，还要运用生石灰对塘口进行清塘消毒，对致病菌、寄生虫及孢子等实施有效的灭杀，也能够起到改善塘底土质的功效。

2.筛选优质健壮苗种放养

在苗种放养环节，一定要注重精心筛选，要将苗种中形体健壮，没有畸形状态的筛选出来，最好规格较为匀称。筛选中要对苗种体表、鳍条及附肢等部位实施检查，排除具有炎症的苗种，出现烂鳃、白肝症状的苗种也要一并筛除。筛选之后的苗种，要保证动作灵活，没有病害体征，建议放养之前对筛选出来的苗种进行一次显微镜下抽检，重点对体表、鳃、肝等部位实施检查，确定其中没有寄生虫，没有致病菌，把好最后一道关口。对罗氏沼虾及南美白对虾而言，则要在采购种苗过程中认真查看检验检疫材料，确保所购苗种没有病毒，以投放健康优质的种苗。

3.按照程序开展放前药浴

放养之前的药浴非常重要，这一环节能够让苗种保持洁净状态进入塘口。一般来讲，鱼类苗种以20毫克/千克浓度高锰酸钾溶液进行20分钟左右药浴，时间把握依据鱼类品种不同有所区别。蟹种药浴水温控制在6—8℃，运用20克/立方米浓度的高锰酸钾进行4—5分钟清洗，也可以运用5%食盐水溶液进行药浴消毒，对河蟹体表细菌与寄生虫进行灭杀。虾类苗种可以在进池后以0.3毫克/千克浓度二溴海因实施全池泼洒消毒。

4.食台食场全面进行杀毒

以0.25千克漂白粉兑水对食台食场四周开展消毒，4—9月份每15天消毒一次。运用石灰轻消方式在灭杀致病菌的同时可有效增加水中钙含量，保持水体偏碱性状态，具体操作中，鳜鱼、虾、蟹等特种水产品用量为每米水深80—100千克/公顷，常规鱼类用量为每米水深225千克/公顷。

5.挑选采购优质配合饵料

饵料必须具有匀称、入水具稳定性和营养全面等特点，并且饵料系数不能偏高，同时要在饵料之中增加稳定维生素C及诱食剂，提高养殖水产品提高进食积极性，保持良好吸收消化功能，缩短生长周期，增强抵御病害的能力。要注意的是不宜运用单一饲料进行喂养，否则容易引发营养元素缺乏导致的营养性病害。在虾、蟹养殖中应当兼顾动物性饵料、全价配合饲料、植物性饲料，均衡饲料配比。

6.借助生物手段调控水质

在养殖水面水质调控方面，应当借助于生物调控方式，为鱼虾蟹生长营造良好环境，主要可以通过水草种植、螺蛳放养或者添加有益菌、浮游生物等方式进行。具体使用手法应当区别对待，如浮游植物借助于光合作用增加水体中氧气含量，抑制氨氮等有毒物质产生，对致病微生物产生遏制作用。借助生物手段调控水质能够促进水体自行净化，减少排水换水次数，有效预防外部水体污染。

7.添置塘口配套增氧设备

塘口增氧设备能够促进水体溶解氧，促进塘中有机物及养殖水产品排泄物、饲料残渣等的氧化，彻底分解成为无机营养盐，提高水质，有效预防形成疾病应激条件。

8.梳理分析病害发生规律